تبليغات
تبلیغات در دانشجو کلوب محک :: موسسه خيريه حمايت از کودکان مبتلا به سرطان ::
جستجوگر انجمن.براي جستجوي مطالب دانشجو کلوپ مي توانيد استفاده کنيد 
برای بروز رسانی تاپیک کلیک کنید
 
امتیاز موضوع:
  • 1 رأی - میانگین امتیازات: 5
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5

تکثیر آزمایشگاهی از پتروکارپوس ماررسپیوم .Roxb :

نویسنده پیام
  • ♔ αϻἰг κнаη ♔
    آفلاین
  • مدیرکل  سایت
    *******
  • ارسال‌ها: 16,105
  • تاریخ عضویت: تير ۱۳۹۰
  • اعتبار: 1090
  • تحصیلات:زیر دیپلم
  • علایق:مبارزه
  • محل سکونت:ایران زمین
  • سپاس ها 34951
    سپاس شده 49155 بار در 13535 ارسال
  • امتیاز کاربر: 551,587$
  • حالت من:حالت من
ارسال: #1
تکثیر آزمایشگاهی از پتروکارپوس ماررسپیوم .Roxb :
تکثیر آزمایشگاهی از پتروکارپوس ماررسپیوم .Roxb :
درخت دارویی در معرض خطر انقراض

چکیده : گره هایی از پترو کارپوس مارسپیوم.Roxb به ترکیبات هفت محیط کشت متفاوت افزوده شدند ، یعنی : MS ، B5 ، WH بدون هورمون رشد ( WHoo ، B5oo ، MSoo )، و به هر محیط 0.3〖mgL〗^(-1) ، BAP و 0.5〖mgL〗^(-1) ، NAA اضافه گردید.
(WHBN ، B5BN ، MSBN)، به محیط MS، 〖mgL〗^(-1) 0.2 ، IBAنیز افزوده شد. گره ها درتمام محیط های کشت مورد مطالعه بخوبی رشد کردند، اما ترکیبات MS بهتر از همه بودند (100% -95 ) حداکثر تعداد رویش شاخه در هر نمونه گیاهی MSoo، 3.25 و در محیط MSIB ،2.26 بود. حداکثر گره ها در هر انشعاب در محیط MSIB( 4.95 ) مشاهده گردید، در حالیکه طول انشعابات ( شاخه ها ) در MSIB، 2.25 سانتی متر و در MSoo 2.21 سانتی متر ماکزیمم طول بود . گیاهان تازه رشد کرده با آب و هوای جدید سازگار شدند و سپس با موفقیت به زمین اصلی منتقل شدند.
مقدمه :
پتروکارپوس مارسپیوم .Roxb که عموماً با نام بیجاسار ( Beejasar ) شناخته شده ، یکی از مهمترین گونه های درختی از خانواده Fabaceae است که ارزش دارویی دارد. چوب آن بسیار پر اهمیت است زیرا دم کرده یا جوشانده ی آن برای بیماری دیابت بکار برده می شود. پوست درخت برای معالجه ی دل درد، و با ، اسهال خونی ، ناراحتیهای ادراری ، بیماری زبانی و دندان درد مورد استفاده قرار می گیرد. صمغ تراوشی بنام کینو ( Kino) ، که از این درخت مشتق شده، بعنوان داروی قابض مورد استفاده قرار میگیرد. این صمغ تلخ و بد مزه است؛ اما ضد سوزش، دافع روده و نیرو بخش کبد، مفید در تمامی بیماریهای جسمی و بند آونده ی خون در آسیب ها مفید برای آنفلونزا و بیماریهای کبدی ، التهاب چشم، دمل ها و جوش ها و عفونت های ادراری می باشد. گل های آن تلخ اند؛ اشتها را زیاد می کنند و باعث نفخ شکم می شوند.
همچنین الوار آن بخاطر کیفیت بالا در فروشگاههای بین المللی بسیار با ارزش است.
تجدید فعالیت طبیعی پتروکارپوس از طریق دانه ها صورت می گیرد. اگر چه سرعت جوانه زدن در رویش آنها بسیار ضعیف گزارش شده، که این امر تا حدی به پوشش غیر قابل نفوذ دانه نسبت داده می شود. همچنین تکثیر آن بوسیله ی تقسیم ریشهنیز دشواریهایی دارد. تکثیر بسیار کند دانه ها از یک سو و بهره برداری بیش از حد از آن برای مصارف دارویی از سوی دیگر زیستگاه اصلی این گونه ی درختی را تهی کرده است. در نتیجه افزایش فاصله ی بین عرضه و تقاضا به معنی وارد آوردن فشار مضاعف بر اینگونه های درختی است. بر اساس این دلایل ، این گونه ی درختی در آستانه ی انقراض است و اگر چنانچه گام های مؤثری در جهت حفاظت آن برداشته نشود بزودی منقرض خواهد شد. از میان 645 گونه گیاه دارویی که در مدهیا پرادیش (Madhya Pradesh) ثبت شده است، 121 گونه را درختان تشکیل می دهند که پترو کارپوس نیز جزء آنهاست و بیش تر آنها بعنوان گونه های در معرض خطر انقراض طبقه بندی شده اند.
به منظور حفاظت از پترو کارپوس تشویق به کشت آن در زمین های مناسب ضروری است، ولی این امر نیازمند مقدار زیادی مواد قابل کشت است. با توجه به مشکلات متداول تکثیر آن و تقاضای بالا برای مواد قابل کشت ، تکثیر گسترده ی این گونه ی درختی می تواند تنها بوسیله تکثیر در آزمایشگاه و در مدت زمان کوتاه کارآمد و اقتصادی باشد.
اما هنوز اطلاعات کافی در باره ی تکثیر آزمایشگاهی گونه ی پتروکارپوس و پاسخ آزمایشگاهی از محیط های مختلف کشت در آزمایشگاه در دسترس نیست. بنابراین، این تحقیق به منظور یافتن محیط کشت پایه در آزمایشگاه و هورمون های رشد برای احیای آزمایشگاهی پتروکارپوس ، انجام شده است.
مواد و روش ها :
ماده گیاهی : دانه های پتروکارپوس بعنوان اولین نمونه های گیاهی مورد استفاده قرارگرفتند . دانه های رسیده از باغ بوتانیکال (Botanical)، متعلق به گروه آموزشی فیزیولوژی گیاهی ، JNKVV، جبل پور ، جمع آوری شده بودند. دانه ها درگونی گذاشته شده و سپس زیر سایه و در مکان خشک انبار شدند.
آماده سازی نمونه های گیاهی( بدون کشت ) : روکش میوه ای سخت دانه ها بطور مکانیکی با کمک قیچی باغبانی بعد از حذف شاخ و برگ ها باز شده بود. این دانه ها به مدت یک شب در آب سترون نگه داشته شدند و روز بعد برای محیط کشت مورد استفاده قرار گرفتند. قبل از ورود به محیط کشت ، سطح آنها با استفاده از محلول 10% Naocl به مدت ده دقیقه ضد عفونی شدند و سپس سه بار با آبی که دوبار ضد عفونی وتقطیر شده بود، شست و شو داده شدند. بدین ترتیب روکش نرم دانه برداشته شد و دانه ها در محیط ضد عفونی شده روی محیط کشت MS بدون هورمون رشد (MSoo) کشت داده شدند. محیط کشت دانه ها، بطور مجزا زیر نور ( 8 ساعت رژیم دوره ی نوری از 55 میکرو مولمS^(-1) 〖molm〗^(-1) m) و در تاریکی ( بوسیله پوشاندن محیط های کشت با یک پارچه سیاه فرآهم گردید ) در شرایط مساعد برای رشد قرار داده شدند.
نمونه های گیاهی جوانه زده در طول مدت 40-35 روز به ارتفاع 5-4 سانتی متر با 3-2 گره رسیدند.
کشت قطعه گرهی : مقاطع گرهی از گیاهک های جوانه زده در محیط آزمایشگاهی که طی دوره 40-35 روزه رشد کرده بودند،برای کشت اولیه مورد استفاده قرار گرفتند. مقاطع گرهی از 1.5-2.0 سانتی متر طول و تنها با یک گره در شرایط استریل شده بریده شدند و برای کشت در هفت محیط کشت که قبلاً تعریف شد، مورد استفاده قرار گرفتند.
شرایط محیط کشت :
سه محیط کشت پایه یعنی MS ،B5 و White's (WH) برای پرورش اولیه قطعات گرهی مورد استفاده قرار گرفتند . هر یک از آنها بدون هورمون رشد بعنوان گروه کنترل در نظر گرفته شدند( تحت عنوان WHoo ، B5oo ، MSoo مشخص شدند ) . بعلاوه این محیط های کشت پایه با〖mgl〗^(-1) 3.0 BAPو 〖mgl〗^(-1) 0.5 NAA (MSBN، B5BN و WHBN) تکمیل شده بودند. علاوه بر این ، محیط MS غنی شده با 〖mgl〗^(-1) 0.2 IBA(MSIB) نیز برای کشت اولیه مورد استفاده قرار گرفت . به تمام محیط های کشت〖gl〗^(-1)30 ساکروز ( نیشکر ) و 〖gl〗^(-1)8 آگار اضافه شده بود، و PH محیط تا 8/5 تنظیم و تعدیل شده بود. محیط های کشت در چگالی( Kg )⁄〖Cm〗^2 2/1 و در دمای °c121به مدت 20 دقیقه اتوکلاو شدند ( ضد عفونی با بخار ). لوله های آزمایش شامل یک گروه با یک گره جوانه ی جانبی زیر 8 ساعت در دمای 2±25 درجه ی سانتیگراد در شرایط مساعد برای رشد قرار داده شدند. این آزمایش دوباره با 20 لوله ی آزمایش در هر عملیات تکرار شد.
سخت شدن محیط گیاهان احیاء شده ( کشت گیاهان احیاء شده درمحیط خاکی ) :
گیاهان ریشه دار شده با آب معمولی ( شیر آب ) کاملاً شسته شدد تا آگار چسبیده به آنها از بین برود و در5/2 سانتی متر جایگاه ریشه کاشته شدند این جایگاه با نسبت های مساوی 1:1:1 با مخلوطی از شن ، خاک وFYM ضد عفونی شده، پر شده بود. سپس گیاهان نشاء زده شده به منظور رشد بیش تر قبل از انتقال به خانه اصلی ، تحت دمای 2±30 درجه ی سانتی گراد و RH %5±60 به مدت 30 روز برای سازگاری با شرایط جدید به گلخانه منتقل شدند. در نهایت تنها گیاهام با طول 30-20 سانتی متر به زمین اصلی منتقل شدند.
اطلاعات درباره ی تعداد شاخه ها در هر گیاه به تعداد گره ها در هر شاخک و طول شاخه 45 روز بعد از ورود قطعات گرهی ثبت شد و با استفاده از طرح کاملاً تصادفی برای تحلیل و آنالیز مورد مطالعه قرار گرفت.
نتایج و بحث ها :
در این تحقیق ، شرایط کشت در طول دوره ی جوانه زنی دانه ها در آزمایشگاه ، بر روی الگوی رویش آنها تأثیراتی داشت. یک مرحله ی تاریکی در زمان جذب آب توسط دانه باعث بزرگ شدن لپه می شود که با تکثیر گیاه و یک شاخه بازمانده از رشد همراه شده بود ( شکل a1). این امر ممکن است نتیجه ی تحریک درونی فاکتور یا فاکتور های رشد، به احتمال زیاد سیتوکینین،در دوره ی تاریکی کامل وقتی که کربو هیدراتهای ذخره شده در نهایت آماده شدند، باشد. برعکس ، دانه های قرار داده شده در 8 ساعت دوره ی نوری دراز شدگی سریعی در شاخه و افزایش کمی در برگها را نشان می داد. ( شکل b 1 ) .
چنین بنظر می رسد که این مسئله بیانگر مصرف کربوهیدراتهای ذخیره شده در برگ است و تبدیل آنها به یک نهال سرزنده ی در حال رشد بدنبال فتوسنتز صورت می گیرد. بعلاوه گره های جدا شده از گیاهانی که در روشنایی رشد کرده بودند ، در مقایسه با تکثیر جوانه ، از زمان تاریکی جدا شده بودند، در تکثیر گروهی واکنش های بهتری در لوله ی آزمایش نشان دادند.
تکثیر جوانه ، از زمان تنظیم رویش گره ها در محیط کشت فاقد هورمونهای تنظیم کننده رشد گیاه، در طول یک هفته آغاز شد. شروع رویش شاخک از گره در دو هفته اتفاق افتاد ( شکل c1 و d ) . همچنین تشکیل شاخه و ریشه در همان محیط کشت بوقوع پیوست . گیاهک های رشد یافته در لوله ی آزمایش با یک شاخه و یک ریشه کامل بودند. هر چند که ایجاد انشعابات بطور طبیعی مشاهده نشده بود ( شکل e1 ). هر گیاهک بین 3 تا 6 گره داشت که اکنون یا برای تکرار کشت دوم روی محیط کشت همانند بالا مورد استفاده قرار می گیرد و یا بدلیل سخت شدن برای تولید مجدد گیاه تحت کنترل قرار می گیرد.
نتایج حاصل از تأثیرات سه محیط کشت پایه یعنی :MS ، B5 ، WH ، با هورمون رشد یا بدون آن ، روی تکثیر آزمایشگاهی پتروکارپوس در جدول 1 ارائه شده است. در این تحقیق گیاهان برون کشت شده درMSoo شاخه های بیش تری در هر گیاه ، در مقایسه با سایر محیط های مرد مطالعه ، تولید کردند. این مسئله می تواند به نسبت متفاوت نیترات آمونیوم در محیط MS مربوط باشد، که خود می تواند بعنوان یک عامل مهم برای بالا بردن نیتروژن و تنظیم PH در طول مدت کشت مورد توجه قرار گیر اما تعداد گره ها در هر شاخک در تمامی ترکیبات MS و نیز در محیطB5oo بیشتر بود. متوسط طول شاخه های تولید شده در محیط های MSoo و B5BN بطور قابل توجهی از سایر محیط های کشت بلندتر بود . بنابراین ، بهترین نتایج حاصل از تکثیر آزمایشگاهی پتروکارپوس از محیط MS بدست آمد. یافته های جدید با گزارش های قبلی از کشت بافت پتروکارپوس هماهنگی داشتند. در حالیکه لاکشمی (Lakashmi) و همکارانش پیشنهاد کردند که محیط B5 برای احیاء گیاهی پتروکارپوس بر محیط MS ارجحیت دارد.
وارد کردن سیتوکینین ها و اکسین ها ( هورمونهای رشد گیاهان ) به محیط کشت، تکثیر آزمایشگاهی و رشد شاخه ها را در چندین گونه ی گیاهی تحریک کرد. به هر حال در این تحقیق ، افزودن BA و NAA به محیط های اصلی کشت ((MSBN، B5BN و WHBN) بطور قابل توجهی تعداد شاخه ها را در هر نمونه گیاهی و تعداد گره ها را در هر شاخک کم کرد. این پدیده می تواند به وجود مقدار کافی از هورمون های درونی برای تکثیر در شرایط مطلوب نسبت داده شود. بعبارت دیگر محیط کشت MSIB ، که برای ریشه زدایی تنظیم شده ، نتایج قابل ملاحظه ای برای تکثیر آزمایشگاهی از گیاه پتروکارپوس مخصوصاً برای تحریک تولید گره های بیش تر در هر شاخک و شاخه هایی با طول بیش تر ارائه داد. هر چند که بیشترین تعداد بوته ها زمانی تشکیل شد که محیط کشت MS فاقدهورمون رشد بود.
تمامی نمونه های گیاهی با شرایط گل خانه و سپس زمین اصلی به خوبی سازگار شدند ( شکلF 1). تشکیل گیاهان تکثیر یافته در آزمایشگاه بیش از 68 درصد بود. تمامی 86 گیاه احیاء شده و رشد کرده به زمین اصلی منتقل شدند، خارج از شواهد آشکار ریخی حاصل از تغییرات چند یاختگی تجانس و هم جوری بسیار بالایی را با یکدیگر نشان دادند. امروزه ایجاد شاخه ی اضافی بوسیله ی انشعابات جانبی ، بعنوان یک تکنیک مفید برای تکثیر ، آزمایش و تمرین است. تحقیق حاضر یک فرایند ساده برای تکثیر سریع غیر جنسی از پترو کارپوس را بوسیله ی کشت گره ها ( جوانه ها) ، نشان می دهد.
جدول 1 . تشکیل جوانه آزمایشگاهی و رشد گره های پتروکارپوس در محیط های مختلف کشت
محیط کشت رویش دانه
(%) تعداد شاخه ها
در هر نمونه گیاهی تعداد گره ها
در هر شاخک طول شاخه ( cm 1)
محیط کشتWhite بدون هورون رشد (MSoo) 64 15/0±28/1 27/0±46/1 09/0±68/0
محیط کشت White+〖mgl〗^(-1) 3.0 BAP+ 〖mgl〗^(-1) 0.5
NAA ( WHBN) 71 23/0±20/1 18/0±02/1 11/0±63/0
محیط MS بدون هورمون رشد (MSoo) 100 63/0±25/3 48/0±12/4 32/0±41/2
محیط MS +〖mgl〗^(-1) 3.0 BAP+ 〖mgl〗^(-1) 0.5
NAA ( WHBN) 97 53/0±80/1
57/0±40/3 27/0±30/1
محیط MS + 〖mgl〗^(-1) 0.2 IBA(MSIB) 95 21/0±26/2 53/0±95/4 29/0±92/2
محیط Gamborg+〖mgl〗^(-1) 3.0 BAP+ 〖mgl〗^(-1) 0.5
NAA ( B5BN) 80 38/0±20/2 28/0±50/1 21/0±20/2
محیط Gamborg فاقد هورمون رشد (B5oo) 78 50/0±60/2 58/0±28/4 25/0±54/1

مطالب مشابه ...


تکثیر آزمایشگاهی از پتروکارپوس ماررسپیوم .Roxb  :

۲۲-۸-۱۳۹۰ ۰۹:۱۶ صبح
جستجو یافتن همه ارسال های کاربر اهدا امتیازاهدای امتیاز به کاربر پاسخ پاسخ با نقل قول

برای بروز رسانی تاپیک کلیک کنید


مطالب مشابه ...
موضوع: نویسنده پاسخ: بازدید: آخرین ارسال
  چگونه تکثیر سلولی، حیات را رقم زد ♔ αϻἰг κнаη ♔ 0 125 ۲۷-۱۱-۱۳۹۰ ۰۱:۳۸ عصر
آخرین ارسال: ♔ αϻἰг κнаη ♔
  تکثیر آزمایشگاهی از پتروکارپوس ماررسپیوم .Roxb : ♔ αϻἰг κнаη ♔ 0 162 ۹-۱۰-۱۳۹۰ ۰۱:۴۱ عصر
آخرین ارسال: ♔ αϻἰг κнаη ♔

پرش به انجمن:

کاربرانِ درحال بازدید از این موضوع: 1 مهمان